5分钟讲透:荧光原位杂交技术步骤和注意事项
荧光原位杂交（FISH）：探秘分子病理学新星FISH，全称Fluorescence in situ hybridization，它的诞生是细胞遗传学与DNA技术结合的创新之作。作为上世纪八十年代末的产物，它在放射性核酸探针的基础上，发展出无放射性的非放射性原位杂交技术，大大提高了精准度和便捷性。
检测流程包括样本前处理，如烤片、脱蜡、酶消化等，然后进行变性杂交和洗涤复染。整个过程大约需要5-7天才能完成，最终通过荧光显微镜观察结果。FISH以其稳定性、快速性、精确的空间定位和多标记功能，广泛应用于癌症鉴别诊断、预后判断以及指导靶向治疗。
洗净尘埃：在37℃取出玻片，用甲酰胺/2×SSC溶液进行三次清洗，再用1×SSC和室温的2×SSC轻洗，最后干燥。染色的秘密：如果使用生物素标记，依次进行封闭液I、avidin-FITC、封闭液II和antiavidin洗涤，确保杂交信号的清晰可见。封存记忆：可选择Mowiol进行封闭，然后冷藏保存，等待观察。
荧光原位杂交 此步骤涉及将变性杂交混合物滴在载玻片上，随后盖上盖玻片并密封。载玻片在42°C的水浴中过夜漂浮，或放置在42°C的培养箱中。取出盖玻片，轻轻去除橡胶溶液，避免移动载玻片，以免染色体和细胞核受损。清洗载玻片以去除未结合或非特异性结合的探针片段。
具体步骤中，如探针在75℃变性，标本在50℃烤片，然后在低温下退火，以利于后续杂交。杂交后，通过洗脱步骤去除非特异性结合，再用荧光染料标记，观察荧光信号，呈现绿色（FITC）与红色（PI）的双重染色，通过荧光显微镜进行观察。
